作用山东省曲阜师范大学生物系(273165)　宫　霞　　
青海省青海师范大学生物系　丁　莉
沈阳体育学院生理生化教研室　高淑杰　　

提要　本文以适量游泳和疲劳游泳的小鼠通过灌服银杏叶提取物建立动物实验模型，观察其心肌线粒体的抗氧化酶的活力和脂质过氧化水平。灌服银杏叶提取物的小鼠通过适量游泳和疲劳游泳后，抗氧化酶(SOD)的活力均显著高于各自的对照组，丙二醛(MDA)的含量均显著低于各自的对照组。结果提示，通过服用银杏叶提取物可减轻由运动产生的内源性自由基对小鼠的伤害，银杏叶提取物具有较强的抗自由基损伤和抗脂质过氧化损伤的作用，是天然的自由基清除剂。

　　关键词　银杏叶提取物　心肌线粒体　自由基　丙二醛　　怎样从天然物质中筛选高效、无毒的自由基清除剂已成为运动医学的一个研究热点。国内外研究报道杏叶提取物(EGb)是天然抗氧化剂，可清除多种自由基。但把EGb用于运动训练方面未曾有文献报道。本文通过建立动物实验模型进行运动训练，对EGb抗自由基损伤，提高抗氧化酶活力进行初步研究，探索运动负荷条件下延缓疲劳发生与疲劳恢复的途径。1　材料和方法1.1　材料：28-30克雄性昆明种小鼠，中国科学院上海实验动物中心提供。1.2　主要试剂：SOD测定试剂盒，GSH-Px测定试剂盒，MDA测定试剂盒，以上购于南京建成生物工程研究所。牛血清蛋白，冰醋酸国产分析纯，考马斯亮蓝G250、Fluka进口分装。1.3　动物模型　　将自由进食脱水混合饲料和普通自来水的无训练小鼠28只，随机分成服EGb组，未服EGb的对照组两个大组，每组又分成游泳组和力竭组两个亚组。服药组每天灌服EGb稀释液1ml，对照组每天灌服生理盐水1ml，灌服15天。实验期间所有动物的进食、饮水如常，末次灌服24小时后进行运动测试。1.4　运动方式　　实验动物在桶式游泳池中(d=50cm)无负重游泳，水温28℃，水深为小鼠体长的3倍，对照游泳组和服药游泳组游泳30分钟取出，对照游泳力竭组和服药游泳力竭组游泳至力竭(力竭判断标准按文献［3］)，乙醚麻醉，剖腹取材。1.5　银杏叶提取物的制备　　采用醇-水提取法［4］，稀释成1mg/ml浓度。1.6　心肌线粒体的制备；用差速离心法［5］。1.7　测定指标　　SOD活力：采用黄嘌呤氧化法；GSH-Px活力：采用DTNB直接法；MDA含量：硫代巴比妥酸荧光法。2　结果表1　小鼠心肌线粒体SOD活性( ±SE，单位：Nu/ml prot)
　 适量游泳 力竭游泳
未服EGb组 349.98±76.16 285.16±92.41
服EGb组 577.06±39.54* 435.90±69.63**
　　与对照组相比，*P<0.001,**P<0.01。　　表1显示，服药适量游泳组和服药力竭游泳组的小鼠心肌线粒体SOD活性均显著高于未服药的对照组。 表2　小鼠心肌线粒体MDA的含量( ±SE，单位：nM/ml prot)
　 适量游泳 力竭游泳
未服EGb组 5.64±2.05 60.47±36.46
服EGb组 2.02±1.41* 37.26±19.73**
　　与对照组比较，*P<0.001，**P<0.01。　　表2显示，服药适量游泳组和服药力竭游泳组的小鼠心肌线粒体MDA的含量均显著低于未服药对照组。 表3　小鼠全血GSH-Px活性( ±SE，单位：μ/ml prot)
　 适量游泳 力竭游泳
未服EGb组 24.15±8.17 13.57±2.35
服EGb组 44.35±12.13* 23.74±6.84**
　　与对照组相比，*P<0.01，**P<0.01　　表3显示，服药适量游泳和服药力竭游泳组的小鼠全血的GSH-Px活力显著升高。3　讨论　　本实验结果表明，力竭游泳的小鼠心肌线粒体的抗氧化酶活性下降，脂质过氧化水平升高，自由基产生和清除的动态平衡失调，出现过氧化损伤。服用EGb的小鼠适量游泳或力竭游泳后，心肌线粒体的抗氧化酶活力相对显著升高，而MDA的含量相对显著降低。EGb的主要活性成份银杏黄酮和银杏内酯，其分子结构中含有多个还原性羟基(-OH)功能基团，可直接清除O-*2*OH、H2O2，捕捉脂质自由基、脂质过氧化自由基和烷自由基等等，通过对这些自由基起一种氢原子供体作用而终止自由基连锁反应链，从而阻止和抑制氧自由基反应和脂质过氧化反应的运动性加剧，抑制丙二醛、共轭二烯等有毒物质的生成［9，10］，同时EGb还可参与调节和提高SOD，GSH-Px等抗氧化酶的活性，故灌服EGb的小鼠心肌线粒体内的氧自由基浓度和MDA等有毒物质都有显著下降，减缓了对SOD，GSH-Px的-SH结构，DNA和其它蛋白的损伤，促使SOD，GSH-Px等生成量增加，活性正常提高，MDA含量下降。另外，本实验还表明EGb可使小鼠全血的抗氧化酶活性显著升高，进一步提示了EGb具有较强的抗氧化、抗自由基的作用，因此，EGb是一种良好的天然自由基清除剂，可防止和延缓疲劳的产生，提高运动能力。我国是银杏的故乡，其拥有量占世界总量的70%，利用得天独厚的资源，开发研制EGb系列产品，在运动训练和医疗保健方面，具有广阔的开发前景。 4　参考文献　　1　Harman D. Mutat Res. 1992;275:257　　2　陈修. 中国中西医结合杂志. 1996，16(7)：388　　3　Dwason CA, et al. Med. Sci. sports 1970, 2:51　　4　庄向平等. 中草药. 1992，23(3)：122-124　　5　Green DE, et al. Biochim. Biophys. Acta 1957, 23:516　　6　Laguens RP, et al. Circulation Res 1967, 21:271-279　　7　Laguens RP, et al. Experiential 1968, 22:244-246　　8　丁树哲. 生物化学生和生物物理学报. 1991，23(4)　　9　陈媛，周玫主编. 自由基医学. 人民军医出版社. 1991　　10　句海松等. 药学学报. 1989，24(11)：807-81